簡要描述:小麥胚芽凝集素,AF488標記是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,是綠色熒光中最亮的WGA綴合物。WGA與糖綴合物結合,其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,用于熒光成像和分析。
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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC15L012 |
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規(guī)格 | 1 mg | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應用領域 | 生物產業(yè) |
小麥胚芽凝集素,AF488標記(下文簡稱“AF488 WAG"),是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,是綠色熒光中最亮的WGA綴合物。WGA與糖綴合物結合,其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列,即幾丁質酶有關。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結合位點,它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中,只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合,而GalNAc只能弱結合。WGA與含有Galβ(1--4)GlcNAcβ(1--3)重復序列(即聚乳糖胺型聚糖)的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA表現(xiàn)出了豐富的糖類特異性結合模式,可用于復雜碳水化合物的結構分析。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
小麥胚芽凝集素,AF488標記 | AC15L012 | 1 mg | 1580 |
運輸與保存
藍冰運輸。4℃短期避光保存,有效期3個月;-15℃長期避光保存,有效期12個月。
適用儀器
熒光顯微鏡 | |
激發(fā): | FITC濾波片 |
發(fā)射: | FITC濾波片 |
推薦孔板: | 黑色透明 |
使用方法
溶液配制
AF488 WAG儲備溶液 (200X)配制
將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中,制成 2 mg/mL 的儲備溶液。
【注】:重新配制的儲備溶液可在 4℃ 下短期儲存,或在 -20℃ 下長期儲存。
AF488 WAG工作溶液 (1X)配制
(1)將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。
【注】:不同細胞系的優(yōu)化染色濃度可能不同?;罴毎耐扑]起始濃度為 5-10 µg/mL。
操作步驟
活細胞染色
用 HHBS 緩沖液清洗細胞2次。
添加 100 µL AF488 WAG工作溶液。
將細胞與AF488 WAG工作溶液在 37℃ 下孵育 10-30 min。
用 HHBS 緩沖液清洗細胞2次。
使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
固定細胞染色
在PBS中使用4%的甲醛固定細胞。【注】:對于固定細胞膜染色,建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區(qū)室染色,如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。
添加 100 µL AF488 WAG工作溶液。
在室溫下用AF488 WAG工作溶液孵育細胞 10-30 min。
用 HHBS 緩沖液清洗細胞2次。
使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
圖示
圖 1.
使用AF488 WAG以 5 µg/mL的濃度在活細胞(Hela細胞) 染色 30 min,然后用Hoechst 33342 *超級純*(貨號:AC12L021)染色。最后使用帶FITC和DAPI濾波片組的熒光顯微鏡成像。
注意事項
本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。
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